大鼠肝星形细胞THSC培养指南

一、细胞培养条件

细胞名称：大鼠肝星形细胞THSC

生长特性：无血清冻存液

培养体系：DMEM

传代方法：建议首次以1:2比例传代

传代情况：每2天更换培养基

备注：请用无菌离心管收集培养基以便后续对比。如果对比培养效果不理想，建议直接选购我们品牌的AG百家乐完全培养基。

二、细胞处理建议

收到细胞后，培养至良好状态时，灌满AG百家乐完全培养液并封好瓶口，这样是运输细胞的最佳方法。接收细胞后，请用75%酒精喷洒整个细胞瓶进行消毒，然后置于超净台内进行无菌操作。随后，将细胞瓶放入37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，以优化细胞状态后再进行后续处理。使用显微镜观察细胞生长情况，并根据观察结果拍摄不同倍数的照片（建议拍摄40x、100x、200x的各一张）。前三天的照片是重要的售后依据，若未提供照片，则默认收到的细胞状态良好。在传代后，建议一部分使用原瓶的完全培养基，另一部分使用自配完全培养基，以便进行对比培养，并在更换培养基后将瓶盖稍微松开。

三、细胞培养步骤

a、细胞传代

若细胞汇合度未超过80%，请将培养瓶中的完全培养液收集至离心管中，并保留5ml的完全培养基，继续放在37℃、5% CO2孵箱中培养；若细胞密度超过80%，则可进行传代。具体步骤如下：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁的PBS清洗细胞1-2次。
2. 加入约1-2ml的0.25%胰蛋白酶消化液至培养瓶中，放入37℃培养箱消化1-2分钟，观察细胞状态；若细胞变圆并开始脱落，立即添加5ml完全培养基终止消化。
3. 轻轻吹打使细胞完全脱落后吸出，再将悬液转移至15ml离心管中，在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清后用1-2ml完全培养基重悬细胞。
4. 按1:2比例分瓶传代（两个T25瓶），补充5-8ml新的完全培养基，最后放入37℃、5% CO2细胞培养箱中继续培养。

b、细胞冻存

1. 当细胞生长至培养瓶的80%时，弃去T25培养瓶中的培养液，并用PBS清洗一次。
2. 加入约1ml的0.25%胰蛋白酶消化液，观察细胞回缩变圆后用5ml完全培养基终止消化，轻轻吹打使细胞脱落后转移至离心管中，1000RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，加入1ml的AG百家乐无血清冻存液，混匀后装入冻存管。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱，如需转入液氮罐，需在-80℃冰箱中存放24小时以上。

c、细胞复苏

1. 从液氮中取出细胞冻存管（佩戴防护装备），快速放入37℃水浴中解冻，直至冻存管中无结晶，然后用75%的酒精擦拭外壁。
2. 将冻存管中的细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，用5ml完全培养基重悬细胞并接种至T25培养瓶，放于37℃、5% CO2细胞培养箱中继续培养。
4. 第二天用新鲜的完全培养基更换，继续培养。

四、注意事项

在运输过程中，一些细胞可能会因贴壁不牢而脱落，这是正常现象。如果细胞脱落较多，请将培养瓶内的所有培养液收集至离心管中，1000RPM离心5分钟，收集上清以作过渡培养。沉淀后加入胰酶1-2ml，轻轻吹打并消化1-2分钟，随后加入5ml完全培养基终止反应，再次离心，弃去上清，最后以1:2比例进行分瓶传代（两个T25），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，并放入37℃、5% CO2细胞培养箱中继续培养。

五、售后条款

1. 细胞出现问题的重发条件

1. 因运输造成的细胞丢失、瓶身破损或培养液严重漏液等情况，可重发。
2. 如细胞出现污染问题，需在收到产品48小时内提供真实实验结果，核实后可重发。
3. 常温发货的细胞若在静置24小时后或干冰发货的细胞复苏后24小时无存活，需提供真实细胞状态照片，重发。
4. 干冰发货细胞在复苏后24小时内或常温发货细胞静置4小时未开封出现污染，可重发。
5. 如果细胞活性问题，请在收到产品7天内提供真实实验结果，使用台盼蓝染色法确认细胞活力，核实后重发。
6. 收到细胞当天及第2、3天请拍照，若3天内未报告，则视为产品合格。若在4-7天内出现问题需提供前3天的照片、问题细胞的图片以及相关操作步骤，与技术人员沟通后由技术人员判定责任，如需重发由责任方承担。

2. 不予重发的情况

1. 客户造成的细胞污染，不予重发。
2. 客户因操作不当导致细胞状态不佳，不予重发。
3. 非本库推荐的培养体系引起的细胞问题，不予重发。
4. 细胞状态不佳且未提供前3天的培养照片，不予重发。
5. 细胞在培养过程中经历其他处理，不予重发。
6. 收到细胞后2天内未通知的问题，不予重发。
7. 具体情况将另行判定。

使用AG百家乐的细胞培养培养系统，确保您在研究中的每一步都获得支持与保障。