AG百家乐人胰腺癌细胞HPAFⅡ的培养说明书

一、细胞培养条件

细胞名称：人胰腺癌细胞HPAFⅡ
生长特性：贴壁生长
冻存条件：无血清冻存液
培养体系：MEM + 10% FBS + 1% 丙酮酸钠 + 1% L-谷氨酰胺 + 1% P/S
贴壁传代方法：首次建议1:2的传代比例，传代周期为2天换液。
备注：用无菌离心管收集瓶中的培养基，留作过渡对比培养，如对比培养效果不理想，建议直接购买我们的AG百家乐完全培养基。

二、细胞收到后的处理

收到细胞后，待其培养至良好状态时，灌满完全培养液并封好瓶口，这是运输细胞的最佳方式。使用75%酒精喷洒整个细胞瓶进行消毒后，放入超净台内进行严格的无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态，然后进行处理。使用显微镜观察细胞生长情况，并拍摄不同倍数的照片保存（最好为40x, 100x, 200x各一张），前三天的照片是重要的售后依据，未提供照片将默认细胞状态良好。传代后建议一瓶使用原瓶的完全培养基，另一瓶使用自配的完全培养基进行对比培养，换液后请将瓶盖松开。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

若细胞未超过80%汇合度，将培养液收集至离心管中，留5ml完全培养基，并放在37℃、5% CO2培养箱中继续培养。如果细胞密度超过80%，可按照以下步骤进行传代：

1. 弃去培养上清，使用不含钙、镁的PBS冲洗细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，置于37℃培养箱消化1-2分钟，观察细胞消化情况；当细胞大部分变圆并脱落后，迅速取回操作台，轻敲培养瓶后加入5ml以上完全培养基终止消化。
3. 轻轻吹打细胞使其完全脱落后，吸出悬液，将其转移到15ml离心管中，在1000 RPM条件下离心5分钟，废弃上清，再加入1-2ml完全培养基重悬。
4. 将细胞悬液按1:2的比例分瓶传代（两个T25瓶），补充5-8ml新的完全培养基，最后置于37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。

b. 细胞冻存

1. 当细胞生长至覆盖培养瓶的80%时，弃去培养液，并用PBS清洗细胞一次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml，观察细胞回缩变圆后加入5ml完全培养基终止消化，并轻轻吹打细胞使其脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000 RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，沉淀细胞后加入1ml的AG百家乐无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转入冻存管中。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱，若后续需将细胞转入液氮罐，需在-80℃冰箱存放24小时以上后再转入液氮罐中。

c. 细胞复苏

1. 佩戴防护面具，从液氮中取出细胞冻存管，快速放入37℃水浴中解冻，直至冻存管内无结晶，之后用75%的酒精擦拭冻存管外壁。
2. 将冻存管内的细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000 RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，用5ml完全培养基重悬细胞，接种至T25培养瓶，放入37℃、5% CO2细胞培养箱中继续培养。
4. 次日更换为新鲜的完全培养基继续培养。

四、注意事项

某些细胞贴壁不牢，在运输过程中易发生细胞脱落，这属正常现象。如脱落细胞较多，可将培养瓶内的培养液收集至离心管，1000 RPM离心5分钟，收集上清作过渡培养（用于后期对比培养），然后沉淀细胞后加入1-2ml胰酶，轻轻吹打、重悬，消化1-2分钟后，加入5ml完全培养基终止反应，再次离心、弃去上清，加入1-2ml完全培养基重悬。接着按照1:2比例进行分瓶传代（两个T25），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后置于37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。

五、售后条款

1）可重发的情况及判定标准

1. 若细胞运输途中遇到细胞丢失、瓶身破损、培养液漏液等情况，可重发；
2. 细胞污染问题，请在收到产品48小时内提供真实实验结果，经核实后可重发；
3. 常温发货细胞静置24小时后或干冰发货细胞复苏后24小时大部分细胞未存活（需提供真实清晰的细胞状态照片），可重发；
4. 收到干冰发货细胞复苏后24小时后或常温发货细胞静置4小时未开封出现污染，亦可重发；
5. 细胞活性问题，需在收到产品7天内提供真实实验结果，使用台盼蓝染色法鉴定细胞活力，经核实后可重发；
6. 在收到细胞当天及第2、3天需拍照，以便售后核实，未告知的视为产品合格；
7. 若在4-7天内出现问题需提供前三天细胞照片及问题照片，以及相关操作详细步骤，技术人员将进行判定，如属我方责任，则可重发。

2）不予重发的情况

1. 客户自行造成的细胞污染，不重发；
2. 客户不正确操作导致细胞状况不佳，不重发；
3. 使用非本库推荐的培养体系导致细胞状态不良，不重发；
4. 如未提供细胞培养前3天的照片，细胞状态不良，不重发；
5. 细胞在培养期间经其他处理，不重发；
6. 收到细胞2天内未告知问题，不重发；
7. 以具体情况而定。

以上为AG百家乐人胰腺癌细胞HPAFⅡ的详细培养说明，请严格遵循步骤和注意事项，以保障细胞的顺利生长与实验效果。