人骨肉瘤细胞HOS培养说明书

一、细胞培养条件

细胞名称：人骨肉瘤细胞HOS

生长特性：贴壁生长

冻存条件：无血清冻存液

培养体系：MEM+10%FBS+1%NEAA+1%P/S

传代方法：首次建议以1:2比例进行传代，2天后更换培养液。备注：请使用无菌离心管收集培养基，以便于后续对比培养。如对比效果不佳，建议直接使用AG百家乐提供的完全培养基。

二、细胞收到后的处理

收到细胞后，待其恢复至良好状态，填满完全培养液并密封瓶口是最佳的运输细胞方法。使用75%酒精消毒整个细胞瓶后，放置于超净台内进行无菌操作。然后，将细胞瓶放入37℃、5%CO2的培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态，之后进行后续处理。在显微镜下观察细胞生长情况，并拍摄不同放大倍数的照片（建议包括40x, 100x, 200x各一张），前三天的照片将作为重要的售后依据。如未提供照片，默认细胞状态良好。（在传代后，建议使用一瓶原瓶的完全培养基，另一瓶使用自制的完全培养基进行对比培养，并在更换液体后略微松开瓶盖。）

三、细胞培养步骤

a、细胞传代：

如果细胞未达到80%汇合度，请将培养瓶中的完全培养液收集至离心管中，保留5ml完全培养基，置于37℃、5%CO2孵箱中培养；当细胞密度超过80%时，进行传代。具体步骤如下：

1. 弃去培养上清，使用不含钙镁离子的PBS轻洗细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，放入37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞消化状态，如细胞大部分变圆并脱落，迅速将其取回操作台，轻敲培养瓶后加入5ml以上完全培养基终止消化反应。
3. 轻轻吹打细胞，使其完全脱落后吸出，转移悬液至15ml离心管中，并在1000RPM下离心5分钟，去除上清液后补加1-2ml完全培养基重悬。
4. 将细胞悬液按照1:2的比例进行分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5%CO2的细胞培养箱中培养。

b、细胞冻存：

1. 待细胞生长至覆盖培养瓶80%面积时，弃去培养液，用PBS洗涤细胞一次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，观察细胞变圆后加入5ml完全培养基以终止消化，轻轻吹打细胞使其脱落，然后转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
3. 去除上清，加入1ml的AG百家乐无血清冻存液，混匀后放入冻存管中。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱保存，若后期需转入液氮罐，请先在-80℃冰箱中存放24小时以上再转入液氮罐。

c、细胞复苏：

1. 从液氮中取出冻存管（请佩戴防护面具），快速置于37℃水浴中解冻，直至无结晶后，用75%酒精擦拭外壁。
2. 将冻存管中的细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，沉淀后用5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶，放置于37℃、5%CO2细胞培养箱中继续培养。
4. 第二天更换为新鲜完全培养基继续培养。

四、注意事项

某些细胞可能在运输过程中发生脱落，这是正常现象。如脱落较多，请将培养瓶中所有培养液收集至离心管，1000RPM离心5分钟，收集上清作过渡培养。沉淀加入胰酶1-2ml，轻轻吹打后消化1-2分钟，继续添加5ml完全培养基以终止反应。再离心，去除上清，补加1-2ml完全培养基进行重悬。然后按1:2比例进行分瓶传代（两个T25），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5%CO2细胞培养箱中培养。

五、售后条款

1. 细胞出现问题可重发的情况：
   • 细胞在运输途中遭遇问题，如丢失、瓶身破损、培养液严重漏液等情形。
   • 细胞污染问题，需在收到产品48小时内提供真实实验结果，经核实后可重发。
   • 常温发货细胞静置24小时后、干冰发货细胞复苏后24小时内，如大多数细胞未存活，需提供真实清晰的细胞状态照片。
   • 在细胞复苏后24小时内或常温发货的细胞静置4小时内未开封且出现污染问题。
   • 细胞活性问题，需在收到产品7天内提供真实实验结果，使用台盼蓝染色法检测细胞活力。
   • 收到细胞当天及第2、3天请拍照，3天未告知的视为产品合格。出现问题的情况需提供细胞前3天照片及相应操作步骤。
2. 细胞出现问题不予重发的情况：
   • 客户造成细胞污染或不正确操作致细胞状态不佳。
   • 使用非推荐培养体系导致细胞状态不良。
   • 未提供细胞培养前3天照片的情况下细胞状态不佳。
   • 经过其他处理的细胞不予重发。
   • 收到细胞后2天内未告知相关问题。

以上内容为人骨肉瘤细胞HOS的培养与操作说明，希望对您的实验工作有所帮助。如有进一步需求，欢迎联系AG百家乐进行咨询与指导。