AG百家乐人套细胞淋巴瘤细胞REC1培养说明书

一、细胞培养条件

细胞名称：人套细胞淋巴瘤细胞REC1

生长特性：悬浮生长

冻存条件：无血清冻存液

培养体系：1640培养基 + 10% FBS + 1% P/S

传代方法：建议初次以1:2比例传代

备注：使用无菌离心管收集培养基，以便进行对比培养。如对比培养效果不佳，建议直接购买AG百家乐的完整培养基。

二、细胞收到后的处理

收到细胞后，培养至良好状态并加入完全培养液，封好瓶口是运输细胞的最佳方式。收到细胞后，使用75%酒精喷洒整个细胞瓶以消毒，随后放入超净工作台中，进行严格的无菌操作。将细胞瓶置于37℃、5% CO2的培养箱静置3-4小时，以稳定细胞状态后再进行后续处理。观察细胞生长情况并拍摄不同倍数的照片保存（建议每个倍数拍摄一张：40x, 100x, 200x），前三天的照片是重要的售后依据，若未提供照片，则默认为收到状态良好。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

当细胞汇合度未超过80%时，将培养瓶中的完全培养液收集至离心管中，保留5ml完全培养基，放入37℃、5% CO2的培养箱中继续培养；当细胞密度超过80%时，进行传代培养，具体步骤如下：

1. 弃去培养上清，使用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，放入37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞消化情况，若大部分细胞变圆并脱落，迅速取回操作台，轻轻敲击培养瓶，加入5ml以上的完全培养基以终止消化。
3. 轻轻吹打细胞，使其完全脱落后吸出，然后将悬液转移至15ml离心管中，在1000 RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2ml完全培养基重悬。
4. 将细胞悬液以1:2的比例分瓶传代（两个T25瓶），并补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最终放入37℃、5% CO2培养箱中培养。

b. 细胞冻存

1. 当细胞生长至覆盖培养瓶的80%时，弃去T25培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，观察细胞回缩变圆后，加入5ml完全培养液以终止消化，轻轻吹打使其脱落，将悬液转移至15ml离心管中，并在1000 RPM下离心5分钟。
3. 弃去上清，加入1ml AG百家乐无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转入冻存管中。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱储存。如需后续转入液氮罐，需在-80℃冰箱中存放24小时以上后再进行转运。

c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出细胞冻存管（注意佩戴防护面具），快速置于37℃水浴中解冻，直至冻存管中无结晶后，用75%的酒精擦拭管外壁。
2. 将冻存管中的细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，在1000 RPM下离心5分钟。
3. 弃去上清，用5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶，放于37℃、5% CO2培养箱中继续培养。
4. 次日更换为新鲜的完全培养基继续培养。

四、注意事项

在运输过程中，部分细胞可能会脱落，这是正常现象。如脱落细胞较多，可将培养瓶的所有培养液收集至离心管中，在1000 RPM下离心5分钟，收集上清进行过渡培养。对于沉淀细胞，添加1-2ml胰酶轻轻吹打，重悬并消化1-2分钟后，加入5ml完全培养基终止反应。再进行离心，弃去上清后补加1-2ml完全培养基重悬，然后按1:2的比例分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2培养箱中培育。

五、售后条款

1）细胞出现问题，可重发的情况有：
    1. 在运输过程中遭遇的各种问题（如细胞丢失、瓶身破损、培养液严重漏液等）将予以重发；
    2. 细胞污染问题需在收到产品48小时内提供真实的实验结果，经核实后重发；
    3. 常温发货的细胞静置24小时后，干冰冻存发货的细胞复苏后24小时内绝大多数细胞未存活（需提供真实清晰的细胞状态照片），将重发；
    4. 干冰冻存发货的细胞复苏后24小时或常温发货的细胞静置4小时且未开封出现污染，将重发；
    5. 细胞活性问题需在收到产品7天内提供真实的实验结果并用台盼蓝染色法鉴定细胞活力，经核实后予以重发；
    6. 收到细胞当天以及第2、3天需拍照，如逾期未告知则视为产品合格。4-7天内如出现问题，提供收到细胞前3天的照片和出现问题时的照片及相关操作步骤，并与技术人员沟通，以便由技术人员判定责任并进行重发。

2）细胞出现问题但不予重发的情况有：
    1. 客户造成的细胞污染将不予重发；
    2. 客户不正确操作导致细胞状态不佳不予重发；
    3. 非本库推荐的细胞培养体系导致细胞状态不佳不予重发；
    4. 细胞状态不佳且未提供细胞培养前三天的照片不予重发；
    5. 在细胞培养时经过其他处理的不予重发；
    6. 收到细胞后两天内未告知的不予重发；
    7. 其他视具体情况而定。

感谢您选择AG百家乐，我们将竭诚为您提供优质的生物医疗服务！