关键词：肝微粒体，药物-药物相互作用（Drug-drug interaction, DDI），细胞色素P450酶（Cytochrome P450，CYP450），时间依赖性抑制（Time-dependent inhibition，TDI）。药物-药物相互作用（DDI）是临床中造成严重不良反应甚至死亡的重要原因之一，因此，对DDI发生的可能性、严重性及其影响程度进行科学评估显得尤为必要。细胞色素P450酶（CYP450）是体内关键的药物代谢酶，其评估主要涉及代谢表型研究、酶诱导与抑制作用的评估。在对CYP450的抑制作用方面，药物的抑制可分为可逆性抑制和时间依赖性抑制（TDI）。与可逆性抑制相比，TDI在用药安全性方面带来的问题更为严重，近年来受到各监管机构及药物研发者的广泛关注。

CYP酶介导的时间依赖性抑制

CYP酶介导的抑制作用是指某些化合物抑制特定CYP450代谢酶的活性，可能导致联用药物代谢减缓、清除率降低及药物暴露量增加，从而引发安全隐患。根据抑制机制的不同，CYP450酶的抑制可分为可逆性抑制和时间依赖性抑制（TDI）。TDI也被称为不可逆性抑制，通常指候选药物的代谢产物通过共价键与酶结合，导致酶的永久性失活。TDI的抑制效应在去除抑制剂后不会立即消失，展现出明显的时间依赖性。

TDI对药物安全性的影响

若药物在联用时受到TDI的影响，可能导致药物暴露的非线性增长、血药浓度显著升高等后果，这给患者带来了重大健康风险。著名的实例包括抗高血压药米贝拉地尔（mibefradil），其被发现对CYP3A4产生不可逆性的抑制，后果是与其联合使用的药物血药浓度显著上升，甚至导致患者出现毒性反应或死亡，最终致使其退出市场。因此，TDI不仅对患者健康构成威胁，并且对制药企业也是巨大的挑战。

时间依赖性抑制的体外实验评估

在评估研究中，通常使用人肝微粒体作为体外孵育系统来评估候选药物对CYP450酶的时间依赖性抑制。目前常规的TDI评估方法包括Single-point法、IC50位移法（IC50 shift）及Kinact/Ki法。

Single-point法

试验设计：选择一个或两个试验浓度（通常是1μM或10μM）、一个探针底物浓度，并在±NADPH预孵育一个时间点进行评估；该方法适用于早期高通量筛选。评价参数为相对剩余活性，若<80%则提示潜在TDI风险。

IC50位移法（IC50 shift）

试验设计：设定一系列试验浓度和探针底物浓度，进行±NADPH预孵育30分钟，因此获得的IC50值用于评估该药物的潜在TDI。若IC50位移≥15，则提示TDI的存在。

Kinact/Ki法

试验设计：包括多种试验浓度和探针底物浓度，进行±NADPH预孵育以多个时间点的方式细致测定，结合临床药代动力学数据进行更精准的TDI风险评估。

IPHASE在TDI研究中的应用

IPHASE作为体外研究生物试剂的先锋，采用IC50位移法确认不同抑制剂对CYP3A4酶的时间依赖性抑制作用，致力于提供高品质的生物试剂以支持药物研发，特别是在药物相互作用方面。我们提供多种动物模型的肝微粒体产品，助力客户进行CYP酶介导的TDI及相关研究。

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参考资料：
[1]谢珊珊，王盼，郭建军，等细胞色素P450酶的时间依赖性抑制研究及其在新药研发中的作用[J]．中国新药与临床杂志，2013,32(6):419-425
[2]ICH指导原则《M12：药物相互作用》2024
[3]NMPA药物相互作用研究技术指导原则（试行）2021。